DBIO - Dissertações de Mestrado / Master Thesis
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Dissertação de Mestrado. Nível intermédio de uma dissertação (4 ou 5 anos de estudo). Contempla também dissertações do período pré-Bolonha para graus académicos que agora são reconhecidos como grau de mestre.
(Aceite; Publicado; Actualizado).
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Browsing DBIO - Dissertações de Mestrado / Master Thesis by Subject "Actividade Antibacteriana"
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- Purificação e caracterização de moléculas com atividade antibacteriana produzidas por bactérias do género BacillusPublication . Sousa, Elsa Cristina Vieira de; Cabral, Carla Manuela Machado Mendes Leite; Toubarro, Duarte NunoAs bactérias produzem várias substâncias antibacterianas desde antibióticos, lisozimas, exotoxinas e também bacteriocinas. As bacteriocinas são péptidos antimicrobianos de síntese ribossomal que têm suscitado um interesse crescente no combate a estirpes resistentes a antibióticos. Algumas espécies de Bacillus produzem bacteriocinas/BLIS que possuem ação contra MRSA e outras estirpes resistentes. As aplicações das bacteriocinas vão desde a Saúde Humana até à utilização como bioconservantes. O objetivo deste trabalho foi o estudo e caracterização da atividade antibacteriana de 2 isolados de Bacillus (S54c e S150c) da Coleção Açoriana de Bactérias Esporulantes, bem como das suas moléculas ativas. Os dois isolados mostraram maior crescimento e maior atividade antibacteriana em meio Brain Heart Infusion após 18 horas de incubação. Para o sobrenadante filtrado destes isolados e para as frações ativas do sobrenadante do isolado S54c foi determinada a estabilidade térmica e a sensibilidade a enzimas hidrolíticas. O resultado destes testes foi avaliado pela determinação da atividade antibacteriana pelo método de difusão em agar contra a bactéria Micrococcus luteus. A atividade dos isolados S54c e S150C contra Staphylococcus aureus e MRSA foi avaliada pelo método descrito para bactérias esporulantes e o espectro de atividade do sobrenadante do isolado S54c foi determinado. O sobrenadante liofilizado do isolado S54c foi fracionado por cromatografia de exclusão molecular, coluna Sephacryl S-200 40 ml, e as frações positivas visualizadas em SDS-PAGE. Os sobrenadantes dos isolados S54c, S150c e a fração>30kDa do sobrenadante do isolado S54c possuem estabilidade térmica até aos 100ºC, a fração entre os 3-30kDa do isolado S54c é estável até aos 121ºC. Mostrou-se que a atividade antibacteriana dos isolados S54c, S150c e a fração>30kDa (S54c) é hidrolisada pela proteinase K e quimiotripsina, enquanto a fração entre os 3-30 kDa(S54c) apenas é hidrolisada pela proteinase K. Os resultados obtidos indicam que a atividade antibacteriana é de origem proteica e permitem classificar estas moléculas como BLIS. Os isolados S54c e S150c mostraram atividade contra S.aureus e MRSA, contudo o S150c apresentou uma atividade mais reduzida. O sobrenadante filtrado do isolado S54c mostrou atividade contra M.luteus e B.cereus e o fracionamento em cromatografia de exclusão molecular resultou na identificação de uma fração ativa. A análise da sequência parcial do gene 16S mostrou que o isolado S54c é uma estirpe de B.cereus. Este trabalho permitiu identificar parcialmente BLIS produzidas por B.cereus S54c e que podem vir a ser purificadas por técnicas cromatográficas.