FCT - Faculdade de Ciências e Tecnologia
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Browsing FCT - Faculdade de Ciências e Tecnologia by Field of Science and Technology (FOS) "Ciências Médicas::Biotecnologia Médica"
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- Development of a mobile health condition enhancer tool for chronic patients in AzoresPublication . Carmo, Carolina Madeira Ramos; Seca, Ana Maria Loureiro; Rohani, Darius AdamAs doenças crónicas são prevalentes em mais de 50% da população da Região Autónoma dos Açores (RAA) levando, na última década, a uma decrescente auto-percepção do bem-estar nesta população. A autogestão é considerada como o procedimento de primeira linha mais eficaz para estas condições e as aplicações mHealth têm mostrado resultados promissores para apoiar esta abordagem. Além disso, esta solução digital permite o rastreio de dados de saúde a serem partilhados, em qualquer altura, com clínicos para a melhoria da terapêutica e melhores resultados de saúde. Globalmente, as ferramentas mHealth têm o potencial de aumentar a eficiência dos recursos dos sistemas de saúde. Neste projecto de tese de mestrado, uma aplicação móvel, Bem Me Quero (BMQ) - Açores, é desenhada tendo em conta os dados recolhidos através de questionários online, bem como seminários com doentes crónicos e clínicos da área. Os resultados mostraram que 80% da população de doentes crónicos estudados consideram as aplicações smartphone mHealth como uma ferramenta útil para melhorar o seu estado de saúde. Funções como o rastreio dos sintomas, conselhos de cuidados de saúde, lembretes de medicação e um fórum para tópicos relacionados com a saúde foram consideradas como as mais valorizadas para apoiar os doentes crónicos nos seus desafios diários. Além disso, os resultados obtidos revelaram que um design de fácil utilização e personalizável é primordial para garantir que estas ferramentas cumpram os seus objectivos. Os resultados desta tese de mestrado clarificam as caraterísticas de uma aplicação móvel após a sua otimização baseada na experiência dos utilizadores, que permitem apoiar e melhorar, numa base diária, a auto-perceção do bem-estar dos pacientes crónicos nos Açores.
- Epidemio-vigilância da fasciolose nos bovinos leiteiros da Ilha de São Miguel : AçoresPublication . Barbosa, Ricardo Borges; Rodrigues, Armindo dos Santos; Garcia, Patrícia Ventura; Pinto, Carlos AugustoA fasciolose causada pelo trematode Fasciola hepatica é considerada uma das parasitoses mais importantes em bovinos de produção leiteira devido a significativas perdas económicas. Este estudo teve como objetivos a determinação das prevalências da fasciolose nos bovinos leiteiros abatidos no Matadouro da ilha de São Miguel, e a determinação das áreas geográficas de maior risco (freguesias e explorações) assim como a determinação do impacto económico da fasciolose nas explorações. De uma amostra de 24 389 animais, 531 foram positivos para a fasciolose, correspondendo a uma prevalência nos animais de 2.18%. De cerca de 1 393 explorações existentes na ilha de São Miguel, 10.8% apresentaram pelo menos um caso registado de fasciolose. Verificou-se que esta parasitose apresenta uma distribuição geográfica mais ampla na ilha de São Miguel e no arquipélago dos Açores em geral, pois observaram-se casos oriundos da ilha das Flores. Ainda que não se tenham verificado diferenças significativas em termos de peso entre animais saudáveis e animais parasitados, constatou-se que quanto maior a idade dos animais, maior o grau de lesão do fígado e o grau de parasitação, o que reflete um maior período de exposição ao fator de risco (ingestão de metacercárias em pastagens infestadas pela Galba truncatula). A informação disponível indicia que existe algum trabalho a fazer junto dos produtores sobre os danos causados pela parasitose e implementação de formas de prevenção adequadas.
- Perfil molecular dos genes ACE2 e TMPRSS2 na população açoriana : estudo da variabilidade genética nos principais genes associados à infeção por SARS-CoV-2Publication . Rocha, Tânia de Fátima Soares; Lima, Maria Manuela de Medeiros; Tiago, Duarte Nuno Toubarro; Raposo, Mafalda Sofia BastosA doença COVID-19 (Coronavirus Disease 2019), causada pelo agente infecioso SARS-CoV-2 (Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2), é a principal responsável pela atual crise de saúde pública a nível mundial. Sabe-se que a doença resulta da interação entre fatores de risco ambientais, fisio-patológicos e genéticos. ACE2 (Angiotensin Converting Enzyme 2) e TMPRSS2 (Transmembrane Protease Serine 2) são os principais genes envolvidos na interação de SARS-CoV-2 com o Homem; variação nestes genes pode contribuir, por isso, para a virulência da infeção e determinar uma resposta diferencial à COVID-19. Este estudo tem como principal objetivo caracterizar o perfil molecular dos genes ACE2 e TMPRSS2 numa amostra representativa da população do arquipélago dos Açores e compará-lo com os perfis estabelecidos para as populações europeia e mundial. Como tal, inicialmente procedeu-se à compilação e caracterização de variantes em ACE2 e TMPRSS2, descritas em bases de dados genómicas e na literatura científica, com base nas suas frequências alélicas (FA) nas populações europeia e mundial e nos seus efeitos funcionais previstos. Adicionalmente, num estudo piloto, identificaram-se variantes nestes genes, a partir de dados de Whole Exome Sequencing (WES), pertencentes a uma amostra de 20 indivíduos da população açoriana. As variantes genéticas (SNVs ou INDELs) de maior interesse, potencialmente relacionadas com alterações na quantidade do transcrito ou na qualidade da proteína produzida, foram selecionadas para posterior genotipagem. Foram genotipadas 20 variantes genéticas (11 em ACE2 e 9 em TMPRSS2), pela tecnologia “iPlex for SNPs and INDELs Genotyping” (AgenaBioscience), numa amostra de 180 indivíduos da população geral açoriana para as quais se calcularam e compararam as frequências alélicas e genotípicas em 3 populações (açoriana, europeia e mundial) usando testes de diferenciação populacional. Avaliaram-se, ainda, outros parâmetros de genética de populações, como o equilíbrio de Hardy-Weinberg e o linkage disequilibrium (LD). No estudo piloto realizado, a partir dos dados WES, foi detetada uma nova variante (ENST00000332149.5: c.727+114G>A) em TMPRSS2, não descrita nas bases de dados genómicas, que carece de validação por Sequenciação de Sanger, e que poderá ser relevante para esta população. Para as 20 variantes genotipadas, não foram detetadas diferenças estatisticamente significativas entre as frequências obtidas na população de estudo e as estabelecidas para a população europeia, realçando a semelhança genética entre ambas as populações, sugestiva de uma idêntica suscetibilidade genética à COVID-19, no que concerne aos genes ACE2 e TMPRSS2. Para as variantes rs12329760, rs8126497 e rs9985159, todavia, a frequência de homozigotia diferiu entre as duas populações, podendo influenciar a suscetibilidade populacional a SARS-CoV-2. De salientar que, no presente estudo, não foi detetada a SNV rs4646116 em ACE2, classificada como potenciadora da infeção por SARS-CoV-2, e foi possível identificar uma variante protetora da infeção, rs12329760, em TMPRSS2 (FA = 17,2%), o que poderá contribuir para uma menor suscetibilidade genética à COVID-19 por parte da população açoriana, no que se refere a ambos os loci estudados. Apesar da baixa frequência alélica obtida para a variante missense rs41303171 em ACE2 (FA = 0,6%), estima-se que cerca de 2 143 açorianos possam ser portadores desta variante de risco, capaz de facilitar o processo de internalização viral. Os resultados obtidos no presente trabalho permitiram a identificação, na população açoriana, de variantes cujo efeito funcional e impacto na doença deverá continuar a ser investigado.
- Pesquisa de péptidos antimicrobianos em isolados Açorianos de Bacillus com ação contra StaphylococcusPublication . Pacheco, Sabrina da Silva; Cabral, Carla Manuela Machado Mendes Leite; Tiago, Duarte Nuno Toubarro; Simões, Nelson José de OliveiraAs bactérias produzem péptidos antimicrobianos que apresentam atividade sobre vários organismos, incluindo bactérias Gram-positivas e Gram-negativas. As bacteriocinas são péptidos antimicrobianos de baixo peso molecular sintetizados por via ribossómica, apresentando diversas aplicações, como a produção de novos fármacos. Algumas bacteriocinas produzidas por Bacillus demonstram atividade contra patógenos multirresistentes, como é o caso do Staphylococcus aureus resistente à meticilina (MRSA). Este trabalho teve como objetivo a identificação de compostos antimicrobianos produzidos a partir de Bacillus isolados do solo dos Açores com ação contra Staphylococcus. De 20 isolados iniciais, pelo método de co-inoculação com M. luteus, S. aureus e E. coli, foram escolhidos 7 isolados que apresentavam elevada atividade antimicrobiana. Procedeu-se à cultura em meio líquido destes 7 isolados, selecionando dois (S117B e S118E) que apresentavam atividade apenas sobre M. luteus. Otimizou-se a produção de AMP’s em meio líquido através da imobilização das células produtoras em esferas de agar. Deste processo resultou a recuperação da atividade contra S. aureus, e o aumento de atividade antimicrobiana, contra M. luteus, que tinha sido perdida quando as células foram transferidas do crescimento em meio sólido para o meio líquido. Foi selecionado o isolado S118E por apresentar mais atividade antimicrobiana, especialmente, contra S. aureus. Utilizando a mesma técnica de imobilização, aumentou-se a produção de sobrenadante. Através da degradação com 5mg/mL de proteinase K e da inativação pelo aumento da temperatura, concluiu-se que o composto ativo apresentava natureza proteica. Baseados nesta informação orientámos o processo de separação para pequenas moléculas de natureza proteica. O sobrenadante das culturas foi recolhido, filtrado e testado em todas as etapas, inicialmente, pelo método de difusão em agar e, posteriormente, substituído pelo método de diluição em meio líquido. O sobrenadante foi concentrado e fracionado tanto por Centricon, como por processos de precipitação, utilizando sais e solventes orgânicos. O sobrenadante do processo de precipitação com acetona otimizado foi fracionado através da coluna Superdex peptide 10/300 GL, coluna de fase reversa com resina C18 e coluna de fase reversa RPC por FPLC. A atividade foi recolhida da coluna Superdex entre os 21 e 22 minutos, indicando para moléculas menores que 5kDa. A atividade antimicrobiana foi, também, eluída com 30% e 60% de acetona na coluna C18 e eluída por volta dos 60% de acetona da coluna RPC. Foi atingida a maior purificação com 220 fold de purificação e 20% de recuperação na amostra 60% C18. Verificou-se que a atividade não era detetável à absorvância de 280nm. Ambas as frações analisadas por MALDI-TOF MS estão enriquecidas em péptidos com peso molecular entre 700 e 1024 Da. A análise do gene 16S identificou o isolado S118E como Bacillus pumilus, posteriormente, confirmado pela análise do genoma com 3,6Mbp. Da mineração genómica resultaram 4 clusters de genes com 78%, 80%, 85% e 91% de similaridade com cluster produtores de lichenisina, bacilibactina, bacilisina e plantazolicina, respetivamente. Confirmou-se a presença do gene pznA que sintetiza para o péptido precursor da plantazolicina e para o gene pznC que sintetiza enzimas modificadoras deste péptido. Este trabalho permitiu identificar bacteriocinas produzidas por Bacillus pumilus S118E com ação contra Staphylococcus aureus sendo necessário mais testes para confirmar a sua atividade anti-MRSA.
- Potencial antienvelhecimento do extrato etanólico de Laurus azorica e seus constituintes químicosPublication . Viveiros, Mariana Moniz; Seca, Ana Maria Loureiro; Barreto, Maria do CarmoO envelhecimento da pele é essencialmente causado pela formação contínua de espécies reativas de oxigénio e por uma exposição excessiva à radiação ultravioleta, provocando alterações na matriz extracelular (ECM) devido ao aumento de atividade das enzimas colagenase, elastase, hialuronidase e tirosinase. A pesquisa de produtos naturais com potencial antienvelhecimento tem sido, nos últimos anos, foco de investigação a nível mundial, demonstrando que as plantas são uma fonte relevante de compostos biologicamente ativos para a proteção da pele. Laurus azorica é uma espécie pouco estudada relativamente às suas atividades biológicas e aos seus constituintes químicos. O estudo desenvolvido nesta dissertação permitiu, pela primeira vez, aprofundar o conhecimento relativo à composição química e ao potencial antienvelhecimento do extrato etanólico, frações e compostos puros isolados de Laurus azorica. A fração MBP-22.1 foi analisada por CG-MS e revelou a presença de 56 compostos, entre eles alguns identificados pela primeira vez no género Laurus. A partir da mesma fração foram isoladas pela primeira vez em Laurus azorica, e caracterizadas estruturalmente usando técnicas espetroscópicas, três lactonas sesquiterpénicas, costunolide, 11,13-desidrosantonina e reinosina. Relativamente à atividade antienvelhecimento, os resultados obtidos mostraram que a fração MBP-22.2 apresentou maior poder antioxidante nos ensaios do DPPH e ABTS (IC50 = 34,67 ± 1,24 μg/mL e IC50 = 4,03 ± 0,47 μg/mL, respetivamente), cerca do dobro dos valores de IC50 obtidos para o padrão trolox, e uma excelente atividade de inibição da tirosinase (IC50 = 1,28 ± 0,35 μg/mL, comparável com o padrão ácido kójico, com IC50=1,82 ± 0,13 μg/mL). No ensaio do branqueamento do β-caroteno, o costunolide mostrou ser o mais ativo, seguido da fração MBP-22.3 (IC50 = 4,08 ± 0,76 μg/mL e 4,98 ± 0,36 μg/mL, respetivamente, cerca de 3,5 vezes e 2,92 vezes mais ativos do que o padrão ácido gálico, que apresentou IC50 = 14,56 ± 0,13 μg/mL). Entre as frações analisadas, a MBP-22.2 é, assim, a que apresenta maior potencial antienvelhecimento.