Departamento de Ciências Agrárias
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Browsing Departamento de Ciências Agrárias by advisor "Baron, Erica"
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- Avaliação da eficácia das lavagens sanitárias em embriões de bovinos produzidos in vitro, infectados pelo serótipo 17 do vírus da língua azulPublication . Marques, Ana Rita da Costa Nunes de Brum; Silva, Joaquim Fernando Moreira da; Marquant-Le Guienne, Brigitte; Baron, EricaA língua azul (BT) ou febre catarral ovina (FCO) é uma doença epizoótica de etiologia vírica que afecta os ruminantes. É de transmissão vectorial e está incluída na lista de doenças de declaração obrigatória nacional e europeia, e no código sanitário para os animais terrestres da Organização Mundial de Saúde Animal (OIE). Com a realização deste trabalho pretendeu-se: aferir, através de PCR-quantitativo em tempo real (qRTi-PCR), se o vírus contamina os ovócitos utilizados na produção in vitro de embriões; verificar se o protocolo da Sociedade Internacional de Transferência de Embriões (IETS) de lavagem de embriões antes da sua transferência é efectivo para a descontaminação desses embriões quando expostos a diferentes concentrações de BTV-17 através de qRTi_PCR e avaliar se o vírus BTV-17 afecta a fertilização e o posterior desenvolvimento embrionário até ao sétimo dia após a fertilização. Para isso, no laboratório de fertilização in vitro (FIV) da “UNCEIA” localizado em Maisons-Alfort, Paris, utilizaram-se um total de 1124 ovócitos de bovino, usados em quatro manipulações e divididos em três grupos: Grupo I – Grupo Controlo (210 ovócitos); Grupo II – Grupo experimental em que 623 ovócitos foram contaminados com BTV-17 e 100 com BTV-8; Grupo III – Grupo experimental em que 191 ovócitos foram cultivados em meio MEM, sem a presença de vírus. Os ovócitos pertencentes ao Grupo II foram divididos em: Grupo II a), em que os ovócitos (n=207) foram contaminados com BTV-17 (1x105 TCID50/mL); Grupo II b), em que os ovócitos (n=207) foram contaminados com BTV-17 (5x105 TCID50/mL); Grupo II c), em que os ovócitos (n=209) foram contaminados com BTV-17, (100x105 TCID50/mL); Grupo II d), em que os ovócitos (n=100) foram contaminados com BTV-8 (5x105 TCID50/mL). Antes de serem divididos em diferentes grupos, um total de 90 ovócitos foram usados para confirmar se nenhum estava contaminado com o vírus BTV. Após a contaminação, os ovócitos foram maturados, fertilizados e cultivados in vitro durante sete dias, após o que os embriões foram avaliados recorrendo a critérios morfológicos e lavados de acordo com as regras da IETS, sendo posteriormente avaliada presença do vírus da língua azul quer nos embriões, quer no líquido de lavagem, utilizando o Kit TaqVet® Bluetongue Vírus All Genotypes e a qRTi-PCR. No total, 234 embriões foram produzidos no grupo controlo, no contaminado com BTV-17 e no grupo em que os ovócitos foram cultivados em MEM. Para o grupo em que os ovócitos foram contaminados com BTV-8, um total de 20 embriões foram produzidos. Não foram observadas diferenças significativas para a produção de embriões para os diferentes grupos. Com este trabalho concluiu-se que: o vírus contamina os ovócitos utilizados na produção de embriões in vitro, mesmo estes tendo a zona pelúcida intacta; as 10 lavagens do protocolo IETS antes da transferência não são suficientes para que o vírus seja eliminado dos embriões; o vírus BTV-17 não afecta a fertilização e o desenvolvimento do zigoto, nas concentrações testadas, até o 7º dia. Assim sendo, uma vez que o vírus não é eliminado nas lavagens e não afecta o desenvolvimento do embrião pode ser fonte de infecção cruzada via transferência de embriões (TE) em animais sãos.
- Gene expression studies on bovine oocyytes and embryos subjected to various heat stress and heat shock conditionsPublication . Pavani, Krishna Chaitanya; Silva, Joaquim Fernando Moreira da; Baron, EricaIncreasing temperature mainly by global warming has been showing rapid environmental temperature chances, unpredictable climatic changes. Increasing temperature has been showing a greater effect on reproductive performance of lactating cows, ultimately affecting dairy economy. Ambient temperatures in subtropical zones during summers affecting cows, as the temperature level were reaching more the upper critical temperature or else above theromonetual zone. Terceira-Azores being considered a dry summer tropical climate, it is important to study the seasonal changes impact on Holstein cows in the islands. Besides this, they still lot unknown factors effecting the heat stress oocytes and embryos, as fertility is a multifactorial problem that affects physiological and cellular functions in several tissues. […]. Aims and Objectives: Increasing environmental temperatures have been showing a greater effect on the fertility of cattle, which eventually affecting global economy of dairy industry. As describe above there is an increasing global warming effect in temperate zone, and subtropical regions , Terceira-Azores (situated in the North Atlantic Ocean: 38° 43' N 27° 12' W) being a dry summer subtropical climate presumed having similar effect. To determine this climatic / Heat stress effect and to study the molecular mechanism involved in reproductive performance of cows following objectives were performed. Objectives Chapter 2: The major objective of this study to evaluate reproductive performances of all day grazing Holstein cows in a warm temperature region of Azores, in relation to environmental stress, but also to determine the in vitro development of oocytes and embryos during cold and warmer months. Apart from this effect of heat shock under different temperatures during in vitro maturation (IVM) of bovine oocytes and further embryonic development after IVF was also evaluated. Chapter 3: To study molecular mechanism/gene expression analysis it is important to stabilize a standardized protocol for the extraction of total RNA from a minimum number bovine oocytes and embryos samples. As so far no proper standardize protocol was descried in specific to Bovine cells. Hence the major aim of this work is to design a standardize protocol which is specific for bovine oocytes and embryos and reliable for the downstream process (Gene amplification and Gene quantification). Chapter 4: To understand the molecular mechanism involved in low fertility rate of cows under heat stress (in vivo and in vitro) the following objective has to be performed. Gene expression studies of developmental genes (Cx43, CDH1, DNMT1 and HSPA14) in different developmental stages (2-cell, 4-cell, morula and blastocyst) of embryos developed from oocytes under prolonged heat shock, as well as oocytes collected during hot and cold seasons has to be studied. Chapter 5: As it is important to understand maternal heat stress factors and to analyze the heat stock condition based on time and exposure, following objectives were performed. Gene expression analysis of kinetic heat shocked oocytes and oocytes matured in the summer and the winter. Chapter 6: An overview and discussion of the results of these studies and their possible implications for the practice and for future research are given.