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  • Efeito do choque térmico na maturação nuclear e avaliação da expressão genética em ovócitos de bovino
    Publication . Lourenço, Joana da Conceição Xavier; Silva, Joaquim Fernando Moreira da; Pavani, Krishna Chatanya
    Factores como radiação, poluentes tóxicos ambientais, stress oxidativo e choque térmico (CT) são muitas vezes apontados como responsáveis pela apoptose em embriões de bovinos, podendo este ser um dos fatores da baixa fertilidade observada nos bovinos durante a época de verão. Desta forma o presente estudo foi elaborado no sentido de avaliar a capacidade de maturação in vitro de ovócitos, após terem sido submetidos a um CT durante 0 (controlo) 6, 12 18 e 24 horas de CT1=39,5 °C e CT2=40,5 °C, bem como a expressão genética dos genes responsáveis pela sua maturação: Cx43, CDH1, DNMT1, HSPA14 e dos genes de referência, GAPDH e SDHA. Para isso, os complexos cumulus-ovócitos (CCOs) (n= 1124) foram aspirados durante os meses de Inverno e submetidos, respetivamente ao CT1 e CT2. Passadas as 24h, os CCOs foram divididos em dois grupos no qual no primeiro foram registadas as taxas de maturação nuclear (TMN), após a fixação e coloração com aceto-orceina (3:1) e no segundo grupo foi analisada a expressão genética, tendo como genes alvo Cx43, CDH1, DNMT1, HSPA14 e como referência os genes de manutenção GAPDH e SDHA. A duração do stress térmico resultou numa diminuição significativa (p <0,05) nas TMN para os ovócitos submetidos ao CT1 quando comparados com os resultados de maturação obtidos para o grupo controlo, diminuindo de 86,4% ± 4,3 para 65,5 ± 0,7; 51,3 ± 0,9; 38,1 ± 1,9 e 36,3 ± 0,9 respetivamente para o CT1 de 6, 12, 18 e 24 h. Esta diminuição de maturação foi ainda mais acentuada para o CT2 em que os valores baixaram para 38,4 ± 16,9; 35,7 ± 7,5; 29,1 ± 3,3; 20,3 ± 7,1 respetivamente para 6, 12, 18 e 24 h de CT. Para a avaliação da expressão de genes, os resultados demonstraram uma tolerância do ovócito ao CT nas 6h, não foi observada nenhuma regulação do gene CDH1 a partir das 12h mas o gene DNMT1 observou-se uma regulação positiva, representando o efeito do CT no desenvolvimento do ovócito.
    2017-04-10Master thesis Restricted access Show more