Browsing by Author "Paiva, Tiago Machado"
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- Valorização do soro do leite pela obtenção de péptidos bioativosPublication . Paiva, Tiago Machado; Simões, Nelson José de Oliveira; Tiago, Duarte Nuno ToubarroAs proteínas do soro do leite são uma fonte de péptidos bioativos capazes de modular respostas fisiológicas no organismo. A melhor forma de obter estes péptidos bioativos é através da hidrólise enzimática. Neste estudo selecionou-se 3 bactérias produtoras de serina proteases (2 Bacillus cereus, isolados s3B e s10B; 1 B. mycoides, isolado s102A), pertencentes ao banco de bactérias da Universidade dos Açores. Os extratos enzimáticos dos isolados foram produzidos em meio mínimo salino e meio mínimo suplementado com proteína do soro do leite, utilizando bactérias em suspensão e bactérias imobilizadas. Os extratos enzimáticos produzidos foram usados para hidrolisar as proteínas do soro do leite comercial e proteínas diretamente separadas do soro do leite de uma industria local produtora de queijo (UNILEITE). Esses hidrolisados foram fracionados por exclusão molecular (Superdex 75) num sistema de FPLC e testados para atividade antibacteriana, antioxidante e antitrombótica. Foi identificada a atividade antibacteriana contra Micrococcus luteus numa fração de 4 a 10.5 kDa do isolado s10B, obtendo-se um halo de 2 mm com 69.4 μg de proteína. Usou-se os testes DPPH e ABTS para testar a atividade antioxidante. Os hidrolisados obtidos com os 3 isolados produziram uma fração peptídica de 1.2 kDa com atividade antioxidante superior a 70% a uma concentração de 25 μg/ml de proteína. O IC50 da fração obtida com as enzimas dos isolados s3B, s10B e s102A foi calculado em 18.85, 18.35 e 15.44 μg/ml, respetivamente. A atividade inibidora da lise do coagulo foi obtida pela medição do retardamento do tempo de lise da euglobulina. Todos os hidrolisados das proteínas do soro do leite testados produziram atividade inibidora da trombólise. A maior atividade foi obtida na fração peptídica de 3.5 e 10.7 kDa do hidrolisado obtido com o isolado s102A, com retardamento superior a 3 horas na lise do coágulo, em comparação com controlo. A atividade inibidora da coagulação foi medida também pelo ensaio da euglobulina. Neste teste, a mesma fração do isolado s102A (3.5 e 10.7 kDa) apresentou uma atividade inibitória da formação de coágulo com um IC50 de 27.75 e depois de parcialmente purificada por troca iónica, apresentou um IC50 de 7.91 μg/ml. As atividades identificadas no presente trabalho têm grande potencial de aplicação Biotecnológica. Os péptidos antimicrobianos e antioxidantes poderão ser incorporados em alimentos, para aumentar o seu tempo de prateleira, e os péptidos com atividade anticoagulante poderão ser utilizados como suplemento alimentar ou no fabrico de alimentos funcionais.