Silva, Joaquim Fernando Moreira daPavani, Krishna ChatanyaLourenço, Joana da Conceição Xavier2018-03-282018-03-282017-04-10Lourenço, Joana da Conceição Xavier. "Efeito do choque térmico na maturação nuclear e avaliação da expressão genética em ovócitos de bovino". 2017. 79 p.. (Dissertação de Mestrado em Engenharia Zootécnica). Angra do Heroísmo: Universidade dos Açores, 2016. [Consult. Dia Mês Ano]. Disponível em www:<http://hdl.handle.net/10400.3/4625>.http://hdl.handle.net/10400.3/4625Dissertação de Mestrado, Engenharia Zootécnica, 10 de abril de 2017, Universidade dos Açores.Factores como radiação, poluentes tóxicos ambientais, stress oxidativo e choque térmico (CT) são muitas vezes apontados como responsáveis pela apoptose em embriões de bovinos, podendo este ser um dos fatores da baixa fertilidade observada nos bovinos durante a época de verão. Desta forma o presente estudo foi elaborado no sentido de avaliar a capacidade de maturação in vitro de ovócitos, após terem sido submetidos a um CT durante 0 (controlo) 6, 12 18 e 24 horas de CT1=39,5 °C e CT2=40,5 °C, bem como a expressão genética dos genes responsáveis pela sua maturação: Cx43, CDH1, DNMT1, HSPA14 e dos genes de referência, GAPDH e SDHA. Para isso, os complexos cumulus-ovócitos (CCOs) (n= 1124) foram aspirados durante os meses de Inverno e submetidos, respetivamente ao CT1 e CT2. Passadas as 24h, os CCOs foram divididos em dois grupos no qual no primeiro foram registadas as taxas de maturação nuclear (TMN), após a fixação e coloração com aceto-orceina (3:1) e no segundo grupo foi analisada a expressão genética, tendo como genes alvo Cx43, CDH1, DNMT1, HSPA14 e como referência os genes de manutenção GAPDH e SDHA. A duração do stress térmico resultou numa diminuição significativa (p <0,05) nas TMN para os ovócitos submetidos ao CT1 quando comparados com os resultados de maturação obtidos para o grupo controlo, diminuindo de 86,4% ± 4,3 para 65,5 ± 0,7; 51,3 ± 0,9; 38,1 ± 1,9 e 36,3 ± 0,9 respetivamente para o CT1 de 6, 12, 18 e 24 h. Esta diminuição de maturação foi ainda mais acentuada para o CT2 em que os valores baixaram para 38,4 ± 16,9; 35,7 ± 7,5; 29,1 ± 3,3; 20,3 ± 7,1 respetivamente para 6, 12, 18 e 24 h de CT. Para a avaliação da expressão de genes, os resultados demonstraram uma tolerância do ovócito ao CT nas 6h, não foi observada nenhuma regulação do gene CDH1 a partir das 12h mas o gene DNMT1 observou-se uma regulação positiva, representando o efeito do CT no desenvolvimento do ovócito.ABSTRACT: Factors such as radiation, environmental toxic pollutants, oxidative stress and thermal shock (CT) was many times pointed as responsible for apoptosis in bovine embryos, which may be one of the factors of low fertility observed in cattle during the summer season. Thus, the present study was designed to assess the maturation of oocytes in vitro capacity, having undergone one o'clock CT for 0 (control) 6, 12, 18 and 24 hours of CT1 = 39.5 ° C and CT2 = 40.5 ° C, as well as gene expression of genes responsible for maturation: Cx43, CDH1, DNMT1, HSPA14 and reference genes, GAPDH and SdhA. For this, the cumulus-oocyte complexes (COCs) (n = 1124) were aspirated during the winter months and submitted respectively to CT1 and CT2. After 24h, COCs were divided into two groups where the first nuclear maturation rates were recorded (TMN), after fixing and staining with aceto-orcein (3: 1) and the second group gene expression was analyzed, Cx43 gene targeting, CDH1, DNMT1, and HSPA14 reference to the housekeeping genes GAPDH and SdhA. The duration of heat stress resulted in a significant decrease (p <0.05) in TMN for oocytes undergoing CT1 compared with the maturation results obtained for the control group, decreasing from 86.4% ± 4.3 to 65, 5 ± 0.7; 51.3 ± 0.9; 38.1 ± 1.9 and 36.3 ± 0.9 respectively for CT1 6, 12, 18 and 24 h. This decrease in maturation was even more pronounced for the CT2 where values fell to 38.4 ± 16.9; 35.7 ± 7.5; 29.1 ± 3.3; 20.3 ± 7.1 respectively 6, 12, 18 and 24 h CT. For review of gene expression, the results demonstrated oocyte tolerance CT in 6h, observed no regulation CDH1 gene from 12pm but the DNMT1 gene are observed a positive control, representing the effect of CT development oocyte.porBovinosGenética AnimalOvogéneseReprodução AnimalBovine OocytesGene AnalysisNuclear MaturationThermal Shockmaster thesis201890801